Цельное сырье. Трава veciy.ru

04.10.18
[1]
переходы:100

скачать файл
Цельное сырье. Трава


МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ









ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА


ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ


Трава ландыша

Листья ландыша

Цветки ландыша

Herba Convallariae

Folia Convallariae

Flores Convallariae

ФС 42-


Собранная и высушенная трава (в период цветения), листья до цветения и в начале цветения, цветки (в период цветения) многолетнего травянистого растения ландыша майского - Convallaria magalis L., ландыша закавказкого - Convallaria transcaucasica Utkin ex Grossh. и ландыша Кейске - Convallaria keiskei Mig. сем. лилейные - Liliaceae.


Подлинность

Внешние признаки. Цельное сырье. Трава. Смесь цельных, реже изломанных листьев, соцветий с цветоносами, отдельных цветков и кусочков цветоносов. Листья эллипитической или ланцетовидной формы с заостренной верхушкой, суживающиеся у основания и постепенно переходящие в длинные замкнутые влагалища, отдельные или охватывающие друг друга по 2 -3. Край листа цельный, жилкование дугонервное. Лист тонкий, ломкий, с голой и слегка блестящей поверхностью. Длина листьев до 20 см, ширина - до 8 см. Соцветие - односторонняя рыхлая кисть из 3-12 (20) желтоватых цветков на ребристом голом цветоносе, длиной до 20 см, толщиной до 1,5 мм. Цветки обоеполые с венчиковидным колокольчатым околоцветником, сростнолепестные, с 6 короткими отогнутыми зубчиками, на коротких цветоножках, с пленчатыми линейными прицветниками. Цвет листьев зеленый, реже буровато - зеленый, цветков - желтоватый, цветоносов - светло - зеленый. Запах слабый. Вкус водного извлечения не определяется.

Листья. Цельные, реже изломанные, эллиптической или ланцетовидной формы с заостренной верхушкой, суживающиеся у основания и постепенно переходящие в длинные влагалища; отдельные или соединенные по 2-3. край листа цельный, жилкование дугонервное. Листовая пластинка, тонкая, ломкая, с голой и слегка блестящей поверхностью. Длина листьев до 20 см, ширина - до 8 см. Цвет листьев зеленый, реже буровато-зеленый. Запах слабый. Вкус водного извлечения не определяется.

Цветки. Смесь соцветий с остатками цветоносов длиной до 20 см, цветков и иногда кусочков цветоносов. Цветонос ребристый, голый, толщиной до 1,5 мм, с односторонней рыхлой кистью из 3-12 (20) желтоватых цветков. Цветки обоеполые с венчиковидным колокольчатым околоцветником, сростнолепестные, с 6 короткими отогнутыми зубчиками, на коротких цветоножках, с пленчатыми линейными прицветниками. Тычинок 6, на коротких нитях, прикрепленных к основанию околоцветника; завязь верхняя, трехгнездная, столбик с расширенным трехлопастным рыльцем.

Цвет цветоносов - светло - зеленый, цветков - желтоватый. Запах слабый. Вкус водного извлечения не определяется.

Измельченное сырье. Трава. Кусочки листьев (зеленого, реже буровато -зеленого цвета), цветоносов (слабо-зеленого цвета) и цветков (желтоватого цвета), проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм. Запах слабый. Вкус водного извлечения не определяется.

Листья. Кусочки листьев различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм. Запах слабый. Вкус водного извлечения не определяется.

Микроскопические признаки. Трава. При рассмотрении листа с поверхности с обеих сторон видны вытянутые по длине листа клетки эпидермиса овальной, прямоугольной, широковеретеновидной, ромбовидной и комбинированной формы с прямыми стенками. Стенки клеток имеют четковидное утолщение. Устьица погруженные, овальные, окружены 4 клетками эпидермиса (тетраперигенный тип). Под верхним эпидермисом видны клетки палисадной ткани, вытянутые по ширине листа (“лежачая” палисадная ткань). Губчатая ткань рыхлая и состоит из разветвленных клеток, вытянутых по ширине листа. В отдельных клетках мезофилла (идиобластах), содержащих слизь, видны пучки тонких рафид и крупные игольчатые кристаллы (стилоиды) кальция оксалата длиной.

Эпидермис венчика с обеих сторон состоит из клеток с ровными тонкими стенками многоугольной формы. Кутикула продольно-морщинистая. Морщинистость очень сильно выраженная. Устьица погруженные, округлые, ориентированы по длине околоцветника, окружены 4-5 клетками эпидермиса (тетра - и пентаперигенный тип). Эпидермис зубчика с сосочковидными выростами, по краю с одноклеточными бахромчатыми волосками. В ткани околоцветника присутствуют идиобласты, содержащие слизь и тонкие рафиды кальция оксалата.

Эпидермис цветоноса состоит из клеток прямоугольной и прямоугольно-веретеновидной формы с прямыми стенками и ровной кутикулой. Устьица тетраперигенного типа. Идиобласты с рафидами и стилоидами такие же как в околоцветнике.

Порошок. При рассмотрении порошка наблюдается смесь из различных частиц:

- обрывков эпидермиса листа, состоящего из клеток овальной, прямоугольной, широковеретеновидной, ромбовидной и комбинированной формы с прямыми четковидно утолщенными стенками с погруженными устьицами тетраперигенного типа (и без них);

- обрывков листа с указанным типом эпидермиса и просвечивающими под ним палисадной тканью, вытянутой по ширине листа, с пучками тонких рафид и/или крупными игольчатыми кристаллами (стилоидами) оксалата кальция;

- обрывков эпидермиса венчика, состоящего из клеток с ровными тонкими стенками многоугольной формы, с продольно-морщинистой кутикулой, погруженными, округлыми устьицами тетра- и пентаперигенного типа (и без них);

- обрывков эпидермиса зубчика с сосочковидными выростами;

- обрывков околоцветника, содержащего идиобласты со слизью и тонкими рафидами оксалата кальция и/или крупными игольчатыми кристаллами - стилоидами;

- пыльцы округлой гладкой двухпоровой;

- обрывков эпидермиса цветоноса, состоящего из клеток прямоугольной и прямоугольно-веретеновидной формы с прямыми стенками и ровной кутикулой, устьицами тетраперигенного типа (и без них), идиобластами с рафидами и/или стилоидами (редко) оксалата кальция (и без них).

Листья. Цельное и измельченное сырье. При рассмотрении листа с поверхности с обеих сторон видны вытянутые по длине листа клетки эпидермиса овальной формы. Устьица погруженные, овальные прямоугольной, широковеретеновидной, ромбовидной и комбинированной формы с прямыми стенками. Стенки клеток имеют четковидное утолщение. Устьица окружены клетками эпидермиса тетраперигенного типа. Под верхним эпидермисом видны клетки палисадной ткани, вытянутые по ширине листа (“лежачая” палисадная ткань). Губчатая ткань рыхлая и состоит из разветвленных клеток, вытянутых по ширине листа.


Р

1

исунок - 1. Трава ландыша - фрагмент листа. Рафиды в паренхиме под эпидермисом [1], (Ув.х250).


1

2

Рисунок - 2. Трава ландыша - фрагмент листа.

Рафиды [1] и игольчатые кристаллы [2], (Ув.х250).


2

1

Рисунок - 3. Трава ландыша - фрагмент листа. Тетрацитные устьица [1] на эпидермисе. Игольчатые кристаллы [2] в паренхиме под эпидермисом, (Ув.х250).

1

Рисунок - 4. Трава ландыша - фрагмент паренхимы цветоноса. Рафиды [1], (Ув.х200).


1

1

Рисунок - 5.Трава ландыша - фрагмент эпидермиса цветоноса.

Тетрацитный тип устьиц [1], (Ув.х125).


1

Рисунок - 6. Трава ландыша - фрагмент нижнего эпидермиса лепестка. Тетрацитный тип устьиц [1], (Ув.х125);

1

2

Рисунок - 7. Трава ландыша - Фрагмент верхнего эпидермиса лепестка. Тетрацитный тип устьиц [1], морщинистость кутикулы [2], (Ув.х200).


1

2

Рисунок - 8. Трава ландыша. Фрагмент лепестка. Сосочковидные выросты [1], пыльца [2], (Ув.х125).


1

2

Рисунок - 9. Трава ландыша. Фрагмент вершины лепестка. Сосочковидные выросты [1], пыльца [2], (Ув.х70).


1

1


Рисунок - 10. Трава ландыша. Фрагмент лепестка. Рафиды [1], (Ув.х 200).

1



Рисунок - 11. Трава ландыша. Пыльца, (Ув.х125).


В отдельных клетках мезофилла, содержащих слизь, видны пучки тонких рафид и крупные игольчатые кристаллы (стилоиды) кальция оксалата.

Порошок. При рассмотрении порошка наблюдается смесь различных частиц:

- обрывков эпидермиса из вытянутых по длине листа клеток овальной, прямоугольной, широковеретеновидной, ромбовидной и комбинированной формы с прямыми четковидно утолщенными стенками с погруженными устьицами тетраперигенного типа;

- обрывков листа с указанным типом эпидермиса и просвечивающими под ним палисадной тканью, вытянутой по ширине листа, пучками тонких рафид и/или крупными игольчатыми кристаллами (стилоидами) кальция оксалата.

Определение основных групп биологически активных веществ

1. 10 мл раствора А, приготовленного для количественного определения гликозидов хромато-спектрофотометрическим методом, упаривают на кипящей водяной бане приблизительно до 3 мл. Объем раствора доводят до 10 мл водой, добавляют 1 мл 10 % раствора свинца ацетата, перемешивают.

Раствор фильтруют через бумажный фильтр, предварительно смоченный водой, в делительную воронку, фильтр промывают 5 мл воды, добавляют 30 мл смеси хлороформ - 96 % спирт этиловый (8:2) и взбалтывают в течение 5 мин. После расслаивания хлороформное извлечение (нижний слой) фильтруют через бумажный фильтр с 3 г безводного натрия сульфата, смоченного 5 мл хлороформно-спиртовой смеси, в выпарительную чашку. Операцию извлечения хлороформно-спиртовой смесью повторяют еще дважды, используя по 25 мл этой смеси. Фильтруют хлороформное извлечение через тот же фильтр в ту же выпарительную чашку, фильтр промывают 10 мл хлороформно-спиртовой смеси (8:2). Извлечение выпаривают на кипящей водяной бане досуха. Сухой остаток растворяют 2 мл 70 % спирта этилового (раствор Б). На стартовую линию хроматографической пластинки (5х15 см) наносят микрошприцом 50 мкл раствора Б. Пластинку с нанесением пробой высушивают на воздухе, затем помещают в хроматографическую камеру и хроматографируют восходящим способом в системе растворителей: хлороформ-ацетон- метанол (6:2:2). Когда фронт растворителей дойдет до края пластинки, пластинку вынимают из камеры, высушивают до удаления следов растворителей. Затем пластинку обрабатывают 1 % раствором ванилина в 10 % растворе хлорной кислоты и нагревают в сушильном шкафу при температуре 80 0С до четкого проявления пятен. На хроматограмме должны быть пятна с Rs 1,5 соответствующее цимарину, пятно с Rs 1,0 соответствующее конваллотоксину, пятно с Rs 0,54 соответствующее конваллотоксолу. Допускается наличие других пятен.

Примечание. Приготовление 1 % раствора ванилина в 10 % растворе хлорной кислоты. 0,1 г ванилина растворяют в 10 мл 10 % раствора хлорной кислоты. Раствор используют свежеприготовленным.

2. К 3 мл элюата, приготовленного для количественного определения, прибавляют 2,5 мл нейтрального раствора натрия пикрата и 0,5 мл 2 % раствора натрия гидроксида, через 10 мин появляется оранжево-желтое окрашивание (гликозиды).

Числовые показатели. Цельное сырье. Трава. Биологическая активность 1 г должна быть не менее 120 ЛЕД; содержание суммы гликозидов в пересчете на конваллотоксин - не менее 1,2 мг; влажность - не более 14 %; соцветий - не менее 5 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм, - не более 3 %; пожелтевших и побуревших листьев и побуревших цветков - не более 5 %; органической примеси - не более 1 %; минеральной примеси - не более 0,5 %.

Листья. Биологическая активность 1 г должна быть не менее 90 ЛЕД; содержание суммы гликозидов в пересчете на конваллотоксин - не менее 0,89 мг; влажность - не более 14 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм, - не более 3 %; пожелтевших и побуревших листьев - не более 5 %; органической примеси - не более 1 %; минеральной примеси - не более 0,5 %.

Цветки. Биологическая активность 1 г должна быть не менее 200 ЛЕД; содержание суммы гликозидов в пересчете на конваллотоксин - не менее 2,0 мг; влажность - не более 12 %; соцветий с побуревшими цветками - не более 5 %; отдельных цветоносов - не более 1 %; органической примеси - не более 0,5 %; минеральной примеси - не более 0,3 %.

Измельченное сырье. Трава. Биологическая активность 1 г должна быть не менее 120 ЛЕД; содержание суммы гликозидов в пересчете на конваллотоксин - не менее 1,2 мг; влажность - не более 14 %; соцветий - не менее 5 %; частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, - не более 10 %; проходящих сквозь сито с размером отверстий 0,5 мм - не более 20 %; пожелтевших и побуревших листьев и побуревших цветков - не более 5 %; органической примеси - не более 1 %; минеральной примеси - не более 0,5 %.

Листья. Биологическая активность 1 г должна быть не менее 90 ЛЕД; содержание суммы гликозидов в пересчете на конваллотоксин - не менее 0,89 мг; влажность - не более 14 %; частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, - не более 10 %; частиц, проходящих сквозь сито с размером отверстий 0,5 мм - не более 20 %; пожелтевших и побуревших кусочков листьев - не более 5 %; органической примеси - не более 1 %; минеральной примеси - не более 0,5 %.

Количественное определение.

Метод1. Активность цветков, травы и листьев ландыша определяют биологическим методом на лягушках по сравнению с стандартным образцом (СО) экстракта ландыша.

Испытание на лягушках. Испытание проводят на травяных лягушках, вводя растворы в лимфатические бедренные мешки (под кожу) или в сердце (в полость желудочка), или на водяных лягушках, вводя раствор под кожу, полость желудочка или в вену. Стандартный и испытуемый образцы готовят в день опыта.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, и сушат в сушильном шкафу в течение 2 ч при температуре 40 - 60 0С; 5 г высушенного сырья измельчают до размера частиц 1 мм и экстрагируют 110 мл 95 % спирта этилового в аппарате Сокслета в течение 6 - 8 ч. Извлечение собирают в цилиндр вместимостью 100 мл и доводят объем 95 % этиловым спиртом до метки (1:20).

Для подкожного введения к 2 мл стандартного образца экстракта ландыша прибавляют 6 мл воды (1:4).

Спирто - водное извлечение (1:20) переводят в спирто - водное в соотношении 1:30 (листья), 1:40 (трава), 1:60 (цветки). Для этого 20 мл спирто - водного извлечения (1:20) выпаривают на кипящей водяной бане до 2 мл и доводят объем до 30 мл (листья); 40 мл (трава) и 60 мл (цветки) водой.

Образующуюся при этом муть или осадок не отфильтровывают, а прибавляют 1-2 капли 5 % раствора натрия гидрокарбоната. Полученное таким образом спирто - водное извлечение (1:20) испытывают на лягушках.

Определив наименьшие дозы стандартного и испытуемого образцов (мл на массу травяной лягушки или в мл на 1 г массы водяной лягушки), вычисляют содержание ЛЕД в 1 г сырья.

Метод 2. Около 2 г (точная навеска) листьев, травы или цветков ландыша, проходящих через сито размером 1 мм, помещают в круглодонную колбу и прибавляют 60 мл 70 % этилового спирта. Присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 часа, после охлаждения извлечение фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. К шроту прибавляют 40 мл 70 % этилового спирта, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, после охлаждения раствор фильтруют в ту же мерную колбу и объем раствора доводят до метки тем же спиртом. (раствор А).

10 мл полученного раствора А упаривают на водяной бане приблизительно до 3 мл. Объем жидкости доводят водой до первоначального объема (10 мл). Добавляют 1 мл 10 % раствора свинца ацетата, перемешивают.

Раствор фильтруют через бумажный складчатый фильтр, предварительно смоченный водой, в делительную воронку, фильтр промывают 5 мл воды, прибавляют 30 мл смеси 95 % спирт этиловый - хлороформ (2:8) и взбалтывают 5 мин.

После расслаивания хлороформное извлечение (нижний слой) фильтруют через бумажный фильтр с 3 г натрия сульфата безводного, смоченного 5 мл хлороформа, в колбу для отгона вместимостью 200 мл. Операцию извлечения спирто-хлороформной смесью повторяют еще дважды, используя по 30 мл спирто-хлороформной смеси того же состава, фильтруют хлороформное извлечение в ту же колбу. Фильтр с натрия сульфатом безводным промывают 10 мл спирто-хлороформной смеси. Полученное спирто-хлороформное извлечение отгоняют под вакуумом при температуре 40-50 0С на роторном испарителе досуха.

Сухой остаток растворяют в 10 мл 25 % спирта этилового, затем колбу промывают 5 мл этого же спирта дважды и раствор переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл. Объем раствора в колбе доводят тем же этиловым спиртом до метки и перемешивают.

25 мл полученного раствора пропускают через колонку с 1,5 г полиамида или с 5,0 г силикагеля L (элюат).

В колбу вместимостью 25 мл помещают 15 мл элюата, 7,5 мл 1 % нейтрального раствора натрия пикрата до метки доводят 2 % раствором натрия гидроксида и тщательно перемешивают. Через 10 мин. измеряют оптическую плотность раствора с помощью спектрофотометра в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 495 нм.

Раствором сравнения служит смесь, состоящая из 15 мл 25 % спирта этилового 7,5 мл 1 % нейтрального раствора натрия пикрата, 2,5 мл 2 % раствора натрия гидроксида.

Содержание гликозидов в мг в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:


D × 100 × 100 × 1000 D × 100000

Х = ——————————— = ————————, где

170 × а × 100 × (100-W) 170 × а × (100-W)

D - оптическая плотность испытуемого раствора;

170-удельный показатель поглощения продуктов реакции конваллотоксина стандартного образца с натрия пикратом в щелочной среде (Е1%1см);

а - навеска сырья, граммы;

W - потеря в массе при высушивании сырья, в процентах;

100 - разведение;

1000 - коэффициент пересчета граммов в миллиграммы;

100 - коэффициент пересчета результатов на 1 г сырья.

Содержание гликозидов в пересчете на конваллотоксин в 1 г должно быть в цветках-не менее 2,0 мг, в листьях-не менее 0,89 мг, в траве-не менее 1,2 мг.

Примечание. 1. Приготовление колонки. 1,5 г полиамида для колоночной хроматографии помещают в стакан вместимостью 50 мл, прибавляют 45 мл воды, перемешивают и выливают в колонку диаметром 1 см и длиной 25 см, жидкость отбрасывают, а оставшуюся жидкость удаляют продуванием воздуха через колонку. Через колонку пропускают 25 мл испытуемого раствора. Элюирование проводят при открытом кране до полного прохождения испытуемого раствора через слой адсорбента.

2. Колонку диаметром 1 см и длиной 25 см заполняют 5 г силикагеля L (марки 100/250μ), для хроматографии, промывают 15 мл 25 % спирта этилового, затем промывную жидкость отбрасывают, а оставшуюся жидкость удаляют продуванием воздуха через колонку. Затем через колонку пропускают 25 мл испытуемого раствора и хроматографируют до полного прохождения образца через слой адсорбента.

3. В случае арбитража использовать Биологический метод.




Тяжелые металлы. Определение проводят согласно ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радиоактивность. Определение проводят согласно ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье».

Остаточные количества пестицидов. Определение проводят согласно ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. Определение проводят согласно ОФС «Микробиологическая чистота».

Упаковка, маркировка и транспортирование. Осуществляется с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья».

Хранение. Хранение ЛРС осуществляется в соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».



скачать файл | источник
просмотреть