МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА
ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
| Трава ландыша Листья ландыша Цветки ландыша Herba Convallariae Folia Convallariae Flores Convallariae | ФС 42- |
Собранная и высушенная трава (в период цветения), листья до цветения и в начале цветения, цветки (в период цветения) многолетнего травянистого растения ландыша майского - Convallaria magalis L., ландыша закавказкого - Convallaria transcaucasica Utkin ex Grossh. и ландыша Кейске - Convallaria keiskei Mig. сем. лилейные - Liliaceae.
Подлинность
Внешние признаки. Цельное сырье. Трава. Смесь цельных, реже изломанных листьев, соцветий с цветоносами, отдельных цветков и кусочков цветоносов. Листья эллипитической или ланцетовидной формы с заостренной верхушкой, суживающиеся у основания и постепенно переходящие в длинные замкнутые влагалища, отдельные или охватывающие друг друга по 2 -3. Край листа цельный, жилкование дугонервное. Лист тонкий, ломкий, с голой и слегка блестящей поверхностью. Длина листьев до 20 см, ширина - до 8 см. Соцветие - односторонняя рыхлая кисть из 3-12 (20) желтоватых цветков на ребристом голом цветоносе, длиной до 20 см, толщиной до 1,5 мм. Цветки обоеполые с венчиковидным колокольчатым околоцветником, сростнолепестные, с 6 короткими отогнутыми зубчиками, на коротких цветоножках, с пленчатыми линейными прицветниками. Цвет листьев зеленый, реже буровато - зеленый, цветков - желтоватый, цветоносов - светло - зеленый. Запах слабый. Вкус водного извлечения не определяется.
Листья. Цельные, реже изломанные, эллиптической или ланцетовидной формы с заостренной верхушкой, суживающиеся у основания и постепенно переходящие в длинные влагалища; отдельные или соединенные по 2-3. край листа цельный, жилкование дугонервное. Листовая пластинка, тонкая, ломкая, с голой и слегка блестящей поверхностью. Длина листьев до 20 см, ширина - до 8 см. Цвет листьев зеленый, реже буровато-зеленый. Запах слабый. Вкус водного извлечения не определяется.
Цветки. Смесь соцветий с остатками цветоносов длиной до 20 см, цветков и иногда кусочков цветоносов. Цветонос ребристый, голый, толщиной до 1,5 мм, с односторонней рыхлой кистью из 3-12 (20) желтоватых цветков. Цветки обоеполые с венчиковидным колокольчатым околоцветником, сростнолепестные, с 6 короткими отогнутыми зубчиками, на коротких цветоножках, с пленчатыми линейными прицветниками. Тычинок 6, на коротких нитях, прикрепленных к основанию околоцветника; завязь верхняя, трехгнездная, столбик с расширенным трехлопастным рыльцем.
Цвет цветоносов - светло - зеленый, цветков - желтоватый. Запах слабый. Вкус водного извлечения не определяется.
Измельченное сырье. Трава. Кусочки листьев (зеленого, реже буровато -зеленого цвета), цветоносов (слабо-зеленого цвета) и цветков (желтоватого цвета), проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм. Запах слабый. Вкус водного извлечения не определяется.
Листья. Кусочки листьев различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм. Запах слабый. Вкус водного извлечения не определяется.
Микроскопические признаки. Трава. При рассмотрении листа с поверхности с обеих сторон видны вытянутые по длине листа клетки эпидермиса овальной, прямоугольной, широковеретеновидной, ромбовидной и комбинированной формы с прямыми стенками. Стенки клеток имеют четковидное утолщение. Устьица погруженные, овальные, окружены 4 клетками эпидермиса (тетраперигенный тип). Под верхним эпидермисом видны клетки палисадной ткани, вытянутые по ширине листа (“лежачая” палисадная ткань). Губчатая ткань рыхлая и состоит из разветвленных клеток, вытянутых по ширине листа. В отдельных клетках мезофилла (идиобластах), содержащих слизь, видны пучки тонких рафид и крупные игольчатые кристаллы (стилоиды) кальция оксалата длиной.
Эпидермис венчика с обеих сторон состоит из клеток с ровными тонкими стенками многоугольной формы. Кутикула продольно-морщинистая. Морщинистость очень сильно выраженная. Устьица погруженные, округлые, ориентированы по длине околоцветника, окружены 4-5 клетками эпидермиса (тетра - и пентаперигенный тип). Эпидермис зубчика с сосочковидными выростами, по краю с одноклеточными бахромчатыми волосками. В ткани околоцветника присутствуют идиобласты, содержащие слизь и тонкие рафиды кальция оксалата.
Эпидермис цветоноса состоит из клеток прямоугольной и прямоугольно-веретеновидной формы с прямыми стенками и ровной кутикулой. Устьица тетраперигенного типа. Идиобласты с рафидами и стилоидами такие же как в околоцветнике.
Порошок. При рассмотрении порошка наблюдается смесь из различных частиц:
- обрывков эпидермиса листа, состоящего из клеток овальной, прямоугольной, широковеретеновидной, ромбовидной и комбинированной формы с прямыми четковидно утолщенными стенками с погруженными устьицами тетраперигенного типа (и без них);
- обрывков листа с указанным типом эпидермиса и просвечивающими под ним палисадной тканью, вытянутой по ширине листа, с пучками тонких рафид и/или крупными игольчатыми кристаллами (стилоидами) оксалата кальция;
- обрывков эпидермиса венчика, состоящего из клеток с ровными тонкими стенками многоугольной формы, с продольно-морщинистой кутикулой, погруженными, округлыми устьицами тетра- и пентаперигенного типа (и без них);
- обрывков эпидермиса зубчика с сосочковидными выростами;
- обрывков околоцветника, содержащего идиобласты со слизью и тонкими рафидами оксалата кальция и/или крупными игольчатыми кристаллами - стилоидами;
- пыльцы округлой гладкой двухпоровой;
- обрывков эпидермиса цветоноса, состоящего из клеток прямоугольной и прямоугольно-веретеновидной формы с прямыми стенками и ровной кутикулой, устьицами тетраперигенного типа (и без них), идиобластами с рафидами и/или стилоидами (редко) оксалата кальция (и без них).
Листья. Цельное и измельченное сырье. При рассмотрении листа с поверхности с обеих сторон видны вытянутые по длине листа клетки эпидермиса овальной формы. Устьица погруженные, овальные прямоугольной, широковеретеновидной, ромбовидной и комбинированной формы с прямыми стенками. Стенки клеток имеют четковидное утолщение. Устьица окружены клетками эпидермиса тетраперигенного типа. Под верхним эпидермисом видны клетки палисадной ткани, вытянутые по ширине листа (“лежачая” палисадная ткань). Губчатая ткань рыхлая и состоит из разветвленных клеток, вытянутых по ширине листа.
Р
1
исунок - 1. Трава ландыша - фрагмент листа. Рафиды в паренхиме под эпидермисом [1], (Ув.х250).
1
2
Рисунок - 2. Трава ландыша - фрагмент листа.
Рафиды [1] и игольчатые кристаллы [2], (Ув.х250).
2
1
Рисунок - 3. Трава ландыша - фрагмент листа. Тетрацитные устьица [1] на эпидермисе. Игольчатые кристаллы [2] в паренхиме под эпидермисом, (Ув.х250).
1
Рисунок - 4. Трава ландыша - фрагмент паренхимы цветоноса. Рафиды [1], (Ув.х200).
1
1
Рисунок - 5.Трава ландыша - фрагмент эпидермиса цветоноса.
Тетрацитный тип устьиц [1], (Ув.х125).
1
Рисунок - 6. Трава ландыша - фрагмент нижнего эпидермиса лепестка. Тетрацитный тип устьиц [1], (Ув.х125);
1
2
Рисунок - 7. Трава ландыша - Фрагмент верхнего эпидермиса лепестка. Тетрацитный тип устьиц [1], морщинистость кутикулы [2], (Ув.х200).
1
2
Рисунок - 8. Трава ландыша. Фрагмент лепестка. Сосочковидные выросты [1], пыльца [2], (Ув.х125).
1
2
Рисунок - 9. Трава ландыша. Фрагмент вершины лепестка. Сосочковидные выросты [1], пыльца [2], (Ув.х70).
1
1
Рисунок - 10. Трава ландыша. Фрагмент лепестка. Рафиды [1], (Ув.х 200).
1
Рисунок - 11. Трава ландыша. Пыльца, (Ув.х125).
В отдельных клетках мезофилла, содержащих слизь, видны пучки тонких рафид и крупные игольчатые кристаллы (стилоиды) кальция оксалата.
Порошок. При рассмотрении порошка наблюдается смесь различных частиц:
- обрывков эпидермиса из вытянутых по длине листа клеток овальной, прямоугольной, широковеретеновидной, ромбовидной и комбинированной формы с прямыми четковидно утолщенными стенками с погруженными устьицами тетраперигенного типа;
- обрывков листа с указанным типом эпидермиса и просвечивающими под ним палисадной тканью, вытянутой по ширине листа, пучками тонких рафид и/или крупными игольчатыми кристаллами (стилоидами) кальция оксалата.
Определение основных групп биологически активных веществ
1. 10 мл раствора А, приготовленного для количественного определения гликозидов хромато-спектрофотометрическим методом, упаривают на кипящей водяной бане приблизительно до 3 мл. Объем раствора доводят до 10 мл водой, добавляют 1 мл 10 % раствора свинца ацетата, перемешивают.
Раствор фильтруют через бумажный фильтр, предварительно смоченный водой, в делительную воронку, фильтр промывают 5 мл воды, добавляют 30 мл смеси хлороформ - 96 % спирт этиловый (8:2) и взбалтывают в течение 5 мин. После расслаивания хлороформное извлечение (нижний слой) фильтруют через бумажный фильтр с 3 г безводного натрия сульфата, смоченного 5 мл хлороформно-спиртовой смеси, в выпарительную чашку. Операцию извлечения хлороформно-спиртовой смесью повторяют еще дважды, используя по 25 мл этой смеси. Фильтруют хлороформное извлечение через тот же фильтр в ту же выпарительную чашку, фильтр промывают 10 мл хлороформно-спиртовой смеси (8:2). Извлечение выпаривают на кипящей водяной бане досуха. Сухой остаток растворяют 2 мл 70 % спирта этилового (раствор Б). На стартовую линию хроматографической пластинки (5х15 см) наносят микрошприцом 50 мкл раствора Б. Пластинку с нанесением пробой высушивают на воздухе, затем помещают в хроматографическую камеру и хроматографируют восходящим способом в системе растворителей: хлороформ-ацетон- метанол (6:2:2). Когда фронт растворителей дойдет до края пластинки, пластинку вынимают из камеры, высушивают до удаления следов растворителей. Затем пластинку обрабатывают 1 % раствором ванилина в 10 % растворе хлорной кислоты и нагревают в сушильном шкафу при температуре 80 0С до четкого проявления пятен. На хроматограмме должны быть пятна с Rs 1,5 соответствующее цимарину, пятно с Rs 1,0 соответствующее конваллотоксину, пятно с Rs 0,54 соответствующее конваллотоксолу. Допускается наличие других пятен.
Примечание. Приготовление 1 % раствора ванилина в 10 % растворе хлорной кислоты. 0,1 г ванилина растворяют в 10 мл 10 % раствора хлорной кислоты. Раствор используют свежеприготовленным.
2. К 3 мл элюата, приготовленного для количественного определения, прибавляют 2,5 мл нейтрального раствора натрия пикрата и 0,5 мл 2 % раствора натрия гидроксида, через 10 мин появляется оранжево-желтое окрашивание (гликозиды).
Числовые показатели. Цельное сырье. Трава. Биологическая активность 1 г должна быть не менее 120 ЛЕД; содержание суммы гликозидов в пересчете на конваллотоксин - не менее 1,2 мг; влажность - не более 14 %; соцветий - не менее 5 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм, - не более 3 %; пожелтевших и побуревших листьев и побуревших цветков - не более 5 %; органической примеси - не более 1 %; минеральной примеси - не более 0,5 %.
Листья. Биологическая активность 1 г должна быть не менее 90 ЛЕД; содержание суммы гликозидов в пересчете на конваллотоксин - не менее 0,89 мг; влажность - не более 14 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм, - не более 3 %; пожелтевших и побуревших листьев - не более 5 %; органической примеси - не более 1 %; минеральной примеси - не более 0,5 %.
Цветки. Биологическая активность 1 г должна быть не менее 200 ЛЕД; содержание суммы гликозидов в пересчете на конваллотоксин - не менее 2,0 мг; влажность - не более 12 %; соцветий с побуревшими цветками - не более 5 %; отдельных цветоносов - не более 1 %; органической примеси - не более 0,5 %; минеральной примеси - не более 0,3 %.
Измельченное сырье. Трава. Биологическая активность 1 г должна быть не менее 120 ЛЕД; содержание суммы гликозидов в пересчете на конваллотоксин - не менее 1,2 мг; влажность - не более 14 %; соцветий - не менее 5 %; частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, - не более 10 %; проходящих сквозь сито с размером отверстий 0,5 мм - не более 20 %; пожелтевших и побуревших листьев и побуревших цветков - не более 5 %; органической примеси - не более 1 %; минеральной примеси - не более 0,5 %.
Листья. Биологическая активность 1 г должна быть не менее 90 ЛЕД; содержание суммы гликозидов в пересчете на конваллотоксин - не менее 0,89 мг; влажность - не более 14 %; частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, - не более 10 %; частиц, проходящих сквозь сито с размером отверстий 0,5 мм - не более 20 %; пожелтевших и побуревших кусочков листьев - не более 5 %; органической примеси - не более 1 %; минеральной примеси - не более 0,5 %.
Количественное определение.
Метод1. Активность цветков, травы и листьев ландыша определяют биологическим методом на лягушках по сравнению с стандартным образцом (СО) экстракта ландыша.
Испытание на лягушках. Испытание проводят на травяных лягушках, вводя растворы в лимфатические бедренные мешки (под кожу) или в сердце (в полость желудочка), или на водяных лягушках, вводя раствор под кожу, полость желудочка или в вену. Стандартный и испытуемый образцы готовят в день опыта.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, и сушат в сушильном шкафу в течение 2 ч при температуре 40 - 60 0С; 5 г высушенного сырья измельчают до размера частиц 1 мм и экстрагируют 110 мл 95 % спирта этилового в аппарате Сокслета в течение 6 - 8 ч. Извлечение собирают в цилиндр вместимостью 100 мл и доводят объем 95 % этиловым спиртом до метки (1:20).
Для подкожного введения к 2 мл стандартного образца экстракта ландыша прибавляют 6 мл воды (1:4).
Спирто - водное извлечение (1:20) переводят в спирто - водное в соотношении 1:30 (листья), 1:40 (трава), 1:60 (цветки). Для этого 20 мл спирто - водного извлечения (1:20) выпаривают на кипящей водяной бане до 2 мл и доводят объем до 30 мл (листья); 40 мл (трава) и 60 мл (цветки) водой.
Образующуюся при этом муть или осадок не отфильтровывают, а прибавляют 1-2 капли 5 % раствора натрия гидрокарбоната. Полученное таким образом спирто - водное извлечение (1:20) испытывают на лягушках.
Определив наименьшие дозы стандартного и испытуемого образцов (мл на массу травяной лягушки или в мл на 1 г массы водяной лягушки), вычисляют содержание ЛЕД в 1 г сырья.
Метод 2. Около 2 г (точная навеска) листьев, травы или цветков ландыша, проходящих через сито размером 1 мм, помещают в круглодонную колбу и прибавляют 60 мл 70 % этилового спирта. Присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 часа, после охлаждения извлечение фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. К шроту прибавляют 40 мл 70 % этилового спирта, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, после охлаждения раствор фильтруют в ту же мерную колбу и объем раствора доводят до метки тем же спиртом. (раствор А).
10 мл полученного раствора А упаривают на водяной бане приблизительно до 3 мл. Объем жидкости доводят водой до первоначального объема (10 мл). Добавляют 1 мл 10 % раствора свинца ацетата, перемешивают.
Раствор фильтруют через бумажный складчатый фильтр, предварительно смоченный водой, в делительную воронку, фильтр промывают 5 мл воды, прибавляют 30 мл смеси 95 % спирт этиловый - хлороформ (2:8) и взбалтывают 5 мин.
После расслаивания хлороформное извлечение (нижний слой) фильтруют через бумажный фильтр с 3 г натрия сульфата безводного, смоченного 5 мл хлороформа, в колбу для отгона вместимостью 200 мл. Операцию извлечения спирто-хлороформной смесью повторяют еще дважды, используя по 30 мл спирто-хлороформной смеси того же состава, фильтруют хлороформное извлечение в ту же колбу. Фильтр с натрия сульфатом безводным промывают 10 мл спирто-хлороформной смеси. Полученное спирто-хлороформное извлечение отгоняют под вакуумом при температуре 40-50 0С на роторном испарителе досуха.
Сухой остаток растворяют в 10 мл 25 % спирта этилового, затем колбу промывают 5 мл этого же спирта дважды и раствор переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл. Объем раствора в колбе доводят тем же этиловым спиртом до метки и перемешивают.
25 мл полученного раствора пропускают через колонку с 1,5 г полиамида или с 5,0 г силикагеля L (элюат).
В колбу вместимостью 25 мл помещают 15 мл элюата, 7,5 мл 1 % нейтрального раствора натрия пикрата до метки доводят 2 % раствором натрия гидроксида и тщательно перемешивают. Через 10 мин. измеряют оптическую плотность раствора с помощью спектрофотометра в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 495 нм.
Раствором сравнения служит смесь, состоящая из 15 мл 25 % спирта этилового 7,5 мл 1 % нейтрального раствора натрия пикрата, 2,5 мл 2 % раствора натрия гидроксида.
Содержание гликозидов в мг в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:
D × 100 × 100 × 1000 D × 100000
Х = ——————————— = ————————, где
170 × а × 100 × (100-W) 170 × а × (100-W)
D - оптическая плотность испытуемого раствора;
170-удельный показатель поглощения продуктов реакции конваллотоксина стандартного образца с натрия пикратом в щелочной среде (Е1%1см);
а - навеска сырья, граммы;
W - потеря в массе при высушивании сырья, в процентах;
100 - разведение;
1000 - коэффициент пересчета граммов в миллиграммы;
100 - коэффициент пересчета результатов на 1 г сырья.
Содержание гликозидов в пересчете на конваллотоксин в 1 г должно быть в цветках-не менее 2,0 мг, в листьях-не менее 0,89 мг, в траве-не менее 1,2 мг.
Примечание. 1. Приготовление колонки. 1,5 г полиамида для колоночной хроматографии помещают в стакан вместимостью 50 мл, прибавляют 45 мл воды, перемешивают и выливают в колонку диаметром 1 см и длиной 25 см, жидкость отбрасывают, а оставшуюся жидкость удаляют продуванием воздуха через колонку. Через колонку пропускают 25 мл испытуемого раствора. Элюирование проводят при открытом кране до полного прохождения испытуемого раствора через слой адсорбента.
2. Колонку диаметром 1 см и длиной 25 см заполняют 5 г силикагеля L (марки 100/250μ), для хроматографии, промывают 15 мл 25 % спирта этилового, затем промывную жидкость отбрасывают, а оставшуюся жидкость удаляют продуванием воздуха через колонку. Затем через колонку пропускают 25 мл испытуемого раствора и хроматографируют до полного прохождения образца через слой адсорбента.
3. В случае арбитража использовать Биологический метод.
Тяжелые металлы. Определение проводят согласно ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Радиоактивность. Определение проводят согласно ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье».
Остаточные количества пестицидов. Определение проводят согласно ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Микробиологическая чистота. Определение проводят согласно ОФС «Микробиологическая чистота».
Упаковка, маркировка и транспортирование. Осуществляется с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья».
Хранение. Хранение ЛРС осуществляется в соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».